ELISA-prosedyre: Trinn for trinn forklaring

ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) er en vanlig laboratoriemetode for å påvise antistoffer eller antigener i blod/serum, bl.a. til HIV-diagnostikk. Prosedyren følger et standardisert protokoll for å sikre pålitelighet.

Trinnene i ELISA

1. Prøvetaking: Blod tatt fra armvene under sterile forhold. Serum separeres.
2. Immobilisering: Spesifikt antigen binds fast i brønnene i en ELISA-plate (typisk 96 brønner).
3. Inkubasjon med pasientserum: Dersom antistoff mot antigenet er tilstede, binder det. (Primært antistoff).
4. Vasking: Buffer fjerner ubundne stoffer.
5. Tilsetting av sekundært antistoff (konjugat): Antistoff mot humant antistoff (ofte fra dyr), merket med et enzym (hestradis peroxidase eller alkalisk fosfatase).
6. Ny vasking: Fjerner overskudd konjugat.
7. Substrattilsetting: Enzymet katalyserer fargeendring (eller fluoroscens/luminescens).
8. Måling: Spektralfotometer måler absorbans (fargeintensitet), som korrelerer med antistoffkonsentrasjon.
9. Tolking: Sammenlignes med positiv/negativ kontroll og kalibratorkurve. Cut-off verdi skiller positivt/negativt.

Kvalitetssikring

Positiv og negativ kontroll i hver plate. Ved HIV: positivt ELISA *alltid* bekreftes med en annen metode (f.eks. Western Blot eller PCR) før diagnose fastsettes, for å unngå falsk positivt.