ELISA-test: Prinsipp, bruk og tolkning

Hva er en ELISA-test?

ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) er en immunologisk analysemetode som detekterer og kvantifiserer antistoffer eller antgener i en prøve (blod, urin, spytt, RVV). Den bruker spesifikt antigent-antistoff-binding og en enzymmarkert deteksjon som gir fargeendring målbart med spektrofotometer.

Hovedtyper ELISA

• Direkte ELISA: Antigen immobilisert → primært antistoff markert med enzym. Enkelt, men lav sensitivitet.
• Indirekte ELISA: Antigen immobilisert → primært antistoff (pasientprøve) → sekundært antistoff (anti-human IgG/IgM) markert med enzym. Høy sensitivitet, brukes til antistoffdeteksjon (HIV, hepatitis, autoimmunt).
• Sandwich ELISA: Antikroppsfangst (capture antibody) → antigen (prøve) → deteksjonsantistoff markert med enzym. Brukes til antigen/proteinmåling (cytokiner, hormoner, tumormarkører). Høy spesifisitet.
• Konkurranse / inhibisjon ELISA: Liten antigen / hapten. Måler lavkonsentrasjon, små molekyler (stoffer, hormoner).

Prosedyre (typisk indirekte / sandwich)

1. Immobilisering: Antigen / antikropp binder til fast fase (plastplate / vel).
2. Blokkering: BSA / kasein / melkpulver for å forhindre uønsket binding.
3. Tilsetning prøve + inkubasjon (binding).
4. Vasking: Fjerner ubundne stoffer (kritisk for lav bakgrunn).
5. Tilsetning enzymmarkert deteksjonsantistoff + inkubasjon.
6. Vasking.
7. Tilsetning substrat (TMB, ABTS, OPD) → fargeendring.
8. Stopp-løsning (syre) → stabiliserer farge.
9. Måling: Absorbans (450 nm, referanse 620–650 nm).
10. Beregning: Standardkurve (kjente konsentrasjoner) → interpolere prøveverdier.

Vanlige anvendelser

• Infeksjonsserologi: HIV, hepatitis (A/B/C/E), syfilis, borrelia, EBV, CMV, toxoplasma, SARS-CoV-2 antistoffer.
• Autoimmun: ANA, anti-dsDNA, anti-CCP, ANCA, TPO-ak.
• Allergi: Spesifikke IgE mot allergenkomponenter.
• Hormoner: TSH, fT4, prolaktin, insulin, steroidhormoner.
• Tumormarkører: PSA, CEA, CA 125, CA 19-9, AFP.
• Terapetisk drug monitoring (biologiske legemidler – anti-drug antibodies).
• Mattrygghet: Allergener (nøtter, melk, gluten), patogener, GMO, antibiotika-rester.
• Dopingkontroll.

Styrker og begrensninger

• Fordeler: Høy sensitivitet/spesifisitet, kvantitativ, høy gjennomstrøming (96/384 velplater), automatiserbart, lav kostnad per prøve, etablert standard.
• Begrensninger: Kryssreaktivitet (falsk positiv), hook-effekt (svært høyt antigen → falsk lavt), matrix-effekter, vinduesperiode (antistoffer ikke ennå dannet), ikke direkte patogen-detektion (PCR/kultur nødvendig for akutt diagnose).
• Kvalitetssikring: Internkontroll (positiv/negativ), ekstern kvalitetskontroll (EQAS), kalibrering, validering.