Behandling av MCF-7/CC12-celler med ABC-transporter-inhibitorer

Vi fant ikke doxorubicinol i MCF-7/DOX2-12-celler eller deres medium, tross høyere uttrykk av AKR-isoformer. Tilsett doxorubicinol kunne ekstraheres og kvantifiseres, noe som utelukker deteksjonsfeil. Behandling med 5β-kolansyre påvirket ikke intraceullært doxorubicinol-nivå eller medias nivåer.

Behandling av celler med ABC-transporter-inhibitorer (Ivacaftor, cyclosporin A) økte intraceullært doxorubicin henholdsvis 800- og 511-ganger. 5β-kolansyre eller cyclosporin A økte doxorubicin i MCF-7/DOX2-12-celler 2,8-ganger. Kombinasjon av 5β-kolansyre og cyclosporin A økte doxorubicin 4,4-ganger sammenlignet med ubehandlede celler. Vi antar at doxorubicinol ikke lokaliserer til kjernen pga. hydroksylering reduserer DNA-affinitet.

For å teste dette, sammenlignet vi DNA-binding av doxorubicin vs doxorubicinol via bindingsskiftanalyse. Både Bmax og Kapp var vesentlig forskjellige: doxorubicinol binder DNA med redusert affinitet og kapasitet. DNA-mikroarray, qPCR og genetisk profilering har vært nyttig for å bestemme genuttrykksvariasjoner knyttet til kjemoterapisvar, men falsk-positivrate er høy pga. mange passasjergener. Flere analysemetoder eksisterer (maskinlæring, manuell kuratering), men utfordringen er datasettstørrelse, antall veier og kompleks statistikk.

I denne studien brukte vi en enkel modell for å undersøke biologien bak doxorubicin-motstand: overrepresentasjon av farmakokinetiske/farmakodynamiske gener i datasett med endret uttrykk i motstandsceller.